Qu'est-ce que le séquençage bisulfite?
Le séquençage bisulfite
est une méthode dans laquelle différentes régions d'ADN sont analysées en utilisant la méthylation. La méthylation est le processus d'ajout d'une molécule spécifique, appelée groupe méthyle, à un nucléotide, dans ce cas généralement une cytosine. Les nucléotides inactifs sont souvent méthylés, de sorte que cette méthode peut être utilisée à diverses fins, de déterminer les régions actives d'un génome pour identifier les régions riches en gènes. Dans le séquençage du bisulfite, les cytosines méthylées ne sont pas affectées par le processus de séquençage, tandis que les cytosines non méthylées sont converties en uracile, un nucléotide que l'on ne trouve généralement dans le matériel génétique, l'acide désoxyribonucléique (ADN.)
Cette méthode est très sensible aux modifications de la méthylation, donc des modifications de la liaison des chercheurs sur des Nucleodes, donc des modifications de la liaison de la liaison peuvent donner des émissions sur les Nucleodes spécifiques. Le bisulfite de sodium convertit la cytosine en uracile, mais la conversion se produit dans un environnement où la cytosine méthylée ne subira pas ce changement. Lorsque le séquençage bisulfite est terminé, l'origineL'AL AL a été converti en une molécule significativement différente. Les cytosines seront grandement épuisées ou potentiellement absentes. Si une cytosine est toujours trouvée dans cette molécule convertie, elle représente une cytosine naturellement méthylée dans le génome considéré.
Comme tous les protocoles expérimentaux, le séquençage du bisulfite présente des inconvénients. Son inconvénient le plus important est qu'il nécessite une concentration de sel très élevée pour fonctionner correctement. Le sel encourage le recuit de l'ADN simple brin dans sa double hélice plus naturelle, et le bisulfite de sodium ne peut pas toujours atteindre les cytosines lorsqu'ils font partie de l'ADN double brin. Si la concentration en sel est trop élevée, un certain nombre de cytosines peuvent ne pas être converties en uracile, entraînant une fausse identification des cytosines méthylées dans un génome. Les agents dénaturés peuvent être nécessaires pour minimiser le nombre d'identifications fausses positives.
grand amoLes UNT de données génomiques ne sont pas nécessaires pour le séquençage du bisulfite, donc la méthode a une application utile analysant les échantillons cliniques. La source d'acide nucléique d'origine n'a pas d'importance, mais la source doit être de l'ADN. En théorie, l'acide ribonucléique (ARN) pourrait être séquencé à l'aide de cette méthode, car la plupart des ARN sont simples et ne seraient pas aussi sensibles aux faux positifs en raison de nucléotides bloqués. Cependant, lorsqu'il est mis en pratique, le séquençage du bisulfite n'est pas utile pour l'ARN, car l'ARN a naturellement de l'uracile. Sans une sorte de marquage externe ou d'addition au protocole, les cytosines converties seraient indiscernables de l'uracile naturel.
Lors de l'entreprise de tout type de méthodologie de séquençage, la précision et la précision sont essentielles. Des méthodes sensibles comme le séquençage du bisulfite offrent un moyen fiable d'analyse de séquence, ce qui permet à son tour l'analyse des gènes et l'identification des cibles pour les médicaments et les thérapies. Bien que cette méthode ne puisse pas être utilisée sur les personnes vivantes, elle peut toujours êtred'une grande aide avec seulement les plus petits échantillons de tissus avec lesquels travailler.