Hvad er total RNA-isolering?
Total ribonukleinsyreisolering (RNA) isolering er en laboratorieteknik, der anvendes til at ekstrahere alt det cellulære RNA fra en vævsprøve. Dette adskiller sig fra andre behandlingsmetoder, som selektivt trækker visse typer RNA ud. En forsker kan f.eks. Ønske at inspicere messenger RNA (mRNA) og kunne arbejde med en prøve for at udvinde netop dette genetiske materiale. Der er et antal laboratorieprotokoller til rådighed for total RNA-isolering ved hjælp af en række produkter fremstillet af videnskabelige leverandører.
Der kan være en række fordele ved at opsamle alt det cellulære RNA fra en vævsprøve. Det giver muligvis mere ren og anvendelig information. Teknikken kan også give forskere mulighed for at kontrollere for nedbrydning, der kan forårsage problemer med eksperimenter. Hvis prøven er af dårlig kvalitet, kan forskeren udtrække RNA igen for at få en renere og mere nyttig samling af RNA. Dette kan være vigtigt for mange forskningsformer, hvor dårlig RNA i starten medfører problemer med eksperimenter på linjen.
Teknikker til total RNA-isolering kan involvere en række kemiske midler. Nogle fokuserer på brugen af ikke-giftige kemikalier for at reducere risikoen for skade på prøven. Sådanne kemikalier begrænser også forurening af RNA nedstrøms og er sikrere for laboratoriearbejdere. Labs har en tendens til at vælge et specifikt kemikalie og en protokol, der skal anbefales til alt personale, og inkluderer en detaljeret beskrivelse af den samlede RNA-isoleringsprocedure i deres manualer. Dette sikrer konsistens i RNA-behandling på anlægget for at give mere stabile og nyttige resultater.
Processen starter med forberedelse af en vævsprøve, der kan variere i størrelse, for at gøre den klar til behandling, hvilke kemiske reagenser der trækker ud det samlede RNA. Teknikere konsulterer labmanualen for at bestemme, hvordan man håndterer prøven og behandler den for at isolere RNA. De kan bruge værktøjer som elektroforeseplader til at kontrollere kvaliteten af prøven på udkig efter tegn på nedbrydning, der kan indikere et problem med den samlede RNA-isoleringsproces.
Forskere kan udføre deres egen samlede RNA-isolering eller delegere denne opgave til en laboratorieassistent, kandidatstuderende eller lignende laboratoriearbejder. Det er også muligt at isolere kontrakter til andre laboratoriefaciliteter. Dette kan nogle gange være nødvendigt for at beskytte et eksperiments integritet ved at bruge en tredjepart til at generere verificerbare og gentagne resultater. I alle videnskabelige artikler, der er baseret på forskning med det isolerede RNA, skal forskeren diskutere metoden, der er brugt til isolering, og hvem der har udført arbejdet.