O que é um blot do norte?
A hibridação de Northern blot é uma técnica usada para detectar níveis de RNA mensageiro (mRNA) em uma amostra e quantificar a quantidade de mRNA presente. Embora existam outras técnicas mais poderosas, o Northern Blot continua sendo o padrão devido à sua simplicidade e facilidade de uso. A técnica de Blotting Northern também permite a comparação direta de múltiplas amostras em um único experimento.
O RNA mensageiro é um tipo de ácido nucleico que é produzido quando um gene está sendo expresso. Um gene que é ligado e funcional dentro de uma célula é transcrito para o mRNA. O mRNA é então transportado para o citoplasma da célula, onde é traduzido em uma proteína. A análise de Northern blot de uma amostra de mRNA celular pode, portanto, fornecer informações úteis sobre a matriz de proteínas que a célula está produzindo. SAMPLES de moléculas de mRNA de tamanhos conhecidas são executadas ao mesmo tempo para fornecer um controle. Depois que a eletroforese está concluída, as amostras são transferidas e imobilizadas em uma membrana sólida, normalmente feita de um material como o nylon. As amostras são então expostas a sondas radiomarcadas por várias horas antes da análise. Durante a análise, o mRNA que hibridou em uma sonda radiomarcada pode ser claramente detectado usando raios-X.
A técnica de Blotting Northern permite a observação dos padrões de expressão gênica entre diferentes tipos de tecido. O RNA mensageiro extraído de células de vários tecidos e tipos de órgãos diferentes pode ser comparado, e as respostas celulares ao estresse, infecção e muitos outros estímulos podem ser examinadas. Observando as diferenças na expressão do mRNA sob diferentes condições, um cientista pode determinar quais tipos de proteínas uma célula produz em resposta a certos estímulos. Isso podeForneça pistas sobre funções de proteínas desconhecidas ou no caso de proteínas conhecidas, informações sobre respostas celulares aos estímulos em questão.
Por exemplo, um blot do norte pode mostrar que a expressão de uma proteína desconhecida aumenta em resposta à presença de uma toxina específica. Pode então ser teorizado que a proteína está envolvida na redução da toxicidade, talvez transportando o produto químico para fora da célula ou convertendo -a em um metabolito. Se as proteínas conhecidas estiverem em exame, a documentação de alterações na expressão de proteínas pode fornecer informações sobre a própria resposta. Se a expressão de um transportador molecular conhecido foi aumentado, por exemplo, pode -se confirmar que a resposta celular à toxina é transportar a toxina para fora da célula.