Co je Chromosome Walking?
Chromozomová chůze je metoda pozičního klonování používaná k nalezení, izolaci a klonování konkrétní alely v genové knihovně. Alela je gen pro určitou genetickou vlastnost předávanou z dospělých na jejich potomky, jako je alela pro hnědé oči v genu pro barvu očí. Někdy může být známo přibližné umístění jedné alely v řetězci kyseliny deoxyribonukleové (DNA). Pro izolaci konkrétní alely pro geneticky přenosnou nemoc může být nutné, aby chromozomová procházka hledala požadovaný vzorek v nemapované sekvenci DNA mimo dříve mapované sekvence.
K nalezení konkrétního genu nemoci začíná chůze u nejbližšího genu, který již byl identifikován, známého jako markerový gen. Každý následný gen v sekvenci je opakovaně testován na to, co je známo jako omezení překrývání, a mapováno na jejich přesné umístění v sekvenci. Nakonec procházení geny dosáhne mutantního genu v nemapované sekvenci, která se váže na fragment genu dané konkrétní choroby. Jakmile je gen klonován, může být jeho funkce plně identifikována. V průběhu tohoto procesu se provádějí testy, aby se plně identifikovaly vlastnosti každého následného klonu, aby se zmapovala jejich umístění pro budoucí použití.
Existuje téměř půl tuctu pozičních klonovacích testů, které se provádějí před chromozomovou procházkou, aby se co nejvíce zúžily konkrétní genetické sekvence, které mohou obsahovat požadovaný mutantní gen pro nemoc. Jakmile jsou nalezeny markery na obou stranách nezmapované pravděpodobné sekvence, chromozomová procházka může začít od jednoho z markerů. Testování na každém následném klonu je složité, časově náročné a liší se podle druhu. Existují různé testy na geny související s rostlinnými chorobami než na geny zapojené do lidské genové knihovny.
Poziční klonování používá genetické markery, o kterých je známo, že obývají chromozomy jedinců, kteří mají specifická onemocnění. Tyto databáze známých společných rysů umožňují testování, které může být použito k identifikaci jednotlivců, kteří mohou nebo nemusí mít určité recesivní geny pro onemocnění, které dosud nebylo prezentováno. Chromozomová chůze, spolu se všemi ostatními testy provedenými před chromozomovou chůzí, vyžaduje výjimečně dobře vybavené laboratoře, v nichž se provádějí všechny klonovací fáze, vyšetření a analýza nalezených mutací.